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测定人血浆中25-OH-VD2 和 25-OH-VD3含量的检测方法
发布时间:2018-12-03   点击次数:1773次

 

说起补钙,营养专家认为:生长期、孕期、更年期、老年期要补 ,钙的补充是一种常态,而且会贯穿人一生。每个人都需要补钙,但是大部分时候,我们只需通过日常饮食就可以获取所需的钙元素。而那些真正需要额外补充钙剂的,多是处于青春期、孕期、更年期、老年期这些阶段的人群。

 

钙能不能吸收和维生素D是否缺乏有关

我们补钙的目的是为了骨骼的健康,从口服钙到沉积在骨骼上的几个环节都需要维生素D参加。维生素D是骨骼健康的重要指标,主要功能是维持人体内钙的代谢平衡以及骨骼形成。研究表明维生素D缺乏会引起一系列疾病,与人体免疫功能异常、心血管疾病、代谢性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤等密切相关。由于公众增加关注维生素D缺乏对于身体健康的影响,在过去的几年内,样品数量检测大大增加。

 

维生素D (Vitamin D) 是类固醇的衍生物,又可分为维生素D2(麦角钙化醇)和维生素D3(胆钙化醇)。维生素D2体内无法产生,来自于饮食摄取,多含于植物性食物中,它是由植物的麦角固醇经阳光照射而合成的。人体皮下储存有从胆固醇生成的7-脱氢胆固醇,受紫外线的照射后,可转变为维生素D3,也可从强化奶或其他肉类食物中获得。

 

所以临床对25-羟维生素D的浓度监测具有非常重要的意义,评估维生素D营养状态,协助对高钙血症、骨质疏松症、佝偻病、甲状旁腺亢进和25羟化缺陷等疾病的临床诊断,指导临床医生对心血管疾病、自身免疫病、糖尿病和某些药物的治疗与补充。

 

多数学者认为,人体血中25-羟维生素D营养判断标准如下:

 

目前常用的检测25-羟维生素D含量的方法有竞争性蛋白结合法(CPBA)、放射免疫法(RIA)、酶联免疫吸附法(ELISA)、化学发光免疫测定法(CLIA)、液相色谱法(HPLC)等。这些方法大部分耗时、步骤冗杂,无法满足临床简便、高通量的要求;并且血液中 维生素D浓度太低,检测限达不到要求。

 

这次我们仍旧使用明星产品SOLA HRP对血浆样品进行预处理,使用Syncronis C18色谱柱保留分离VD,建立了测定人血浆中25-OH-VD2 和 25-OH-VD3含量的检测方法。

 

前处理步骤:

10mg 2mL SOLA HRP 96 孔板

(PN:60309-001)

活化

500℃甲醇,500μL 含2% 甲酸的水

上样

200μL 血浆

清洗

200μL 含水/ 甲醇(60:40)

洗脱

200μL 甲醇2 次

40℃氮气吹干后用水:

乙腈定容到100μL

 

LC方法:

色谱柱:

Syncronis C18 1.7μm 50×2.1 mm

(PN:97102-052130)

流动相:

A: 水+0.1% 甲酸

B: 乙睛+0.1% 甲酸

梯度方法:

2min 内,70-100%B

流速:0.8mL/min

柱温:40℃

进样量:50μL

 

灵敏度:

LOQ 5ng/mL

 

线性范围:

血浆中25- 羟基Vit D2 和25- 羟基Vit D3在5 -1000ng/mL 浓度范围成线性,r2=0.9968 和0.9981

 

回收率结果:

血浆样品添加25-OH Vit D2 和25-OH Vit D3 的回收率>94%,RSD<4.0%。

 

体内维生素D浓度的准确定量是诊断维生素D缺乏相关疾病诊断和治疗反馈效果的重要指标。采用SOLA HRP对样品进行预处理,Syncronis C18液相色谱柱保留,所得25-OH-VD2 和 25-OH-VD3的LOQ、标准曲线、回收率均符合临床检测要求,具有非常高的灵敏度、特异性和准确性,适用于血浆基质中维生素D临床样本的快速检测。

 

后小编啰嗦一句,体内维生素D的水平,决定每个人补充维生素D的利弊。我们不推荐没有任何理由地普遍补充维生素D。

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