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PC HILIC色谱柱动物源食品中利巴韦林残留量的测定
发布时间:2020-04-20   点击次数:275次

近年来,抗病毒的yao物在动物上的滥用现象频繁发生,可直接导致病毒耐药性的产生,严重影响药物对人的治疗作用,对人类健康构成了潜在威胁。

因此,我国农业部明令禁止动物使用利巴韦林等抗病毒yao物,并且出台了动物源食品中抗病毒yao物的检测标准,切实保障动物源食品的安全。

 

大曹技术中心参考《出口动物源食品中利巴韦林残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法》(SN/T 4519-2016)标准,在LC-MS上建立了利巴韦林标准品的检测方法。

 

SN/T 4519-2016 规定了色谱柱类型

 

那么问题来了?

 

什么是两性离子型亲水相互作用色谱柱?

跟一般的亲水色谱柱有什么区别呢?

利巴韦林检测为什么使用这款色谱柱?

 

01

两性离子型亲水相互作用色谱柱

 

两性离子型亲水相互作用色谱柱,是固定相键合了两性离子的亲水型色谱柱。

 

然而,目前市面上大多数的亲水性色谱柱(HILIC),通常键合的中性或者非两性的带电基团,对极性化合物保留能力不够,或容易产生静电力吸附导致拖尾。

 

大阪曹達独立研发的两性离子型亲水色谱柱——PC HILIC,键合为PC(磷酸胆碱)基团,它是构成细胞膜的成分,拥有高亲水性和生体适应性。

PC HILIC 键合相结构

 

PC两性离子键合相的优势:

 

1、形成稳定的“富水层”,对极性物质保留能力更好;

 2、两性离子型键合相对化合物额外的静电力吸附少,峰形更加尖锐;

 3、低浓度的缓冲盐调节,即可实现分离效果的提升。

 

好了,话不多说,咱们来看看利巴韦林的检测方法吧。如果您想了解更多PC HILIC & CAPCELL CORE PC的内容,请直接阅读文末内容

 

02

SN/T 4519-2016利巴韦林的分析方法

 

首先,使用核壳型高柱效两性离子键合亲水性相互作用色谱柱CAPCELL CORE PC S2.7; 2.1mm i.d.×150mm,在5 mmol/L乙酸铵(0.2%甲酸)-乙腈条件下进行分析,结果如图1所示,利巴韦林在HILIC模式下,能够获得良好保留与良好峰形,出峰时间为3.57min,总分析时间9.5min。

 

图1 SN/T条件下LC-MS分析结果

 

HPLC Conditions

色谱柱:CAPCELL CORE PC S2.7; 2.1mm i.d.×150mm

流动相:A:5mmol/L乙酸铵(0.2%甲酸) B:乙腈

           B% 95%(0min) ->95%(2min) ->70%(4min) ->40%(5min) ->95%(6min) ->95%(10min)

流  速:0.4mL/min

温  度:30°C

检  测:Qtrap 5500; ESI; Positive; MRM

进样量:2 µL

浓  度:2 ng/mL(水溶后使用初始比例流动相稀释)

 

03

利巴韦林的LC-MS快速分析方法

 

由于CAPCELL CORE PC色谱柱能够对利巴韦林得到良好保留结果,也可以使用更短色谱柱以获得更快速的分析结果。我们重新优化梯度后,得到结果如图2所示,出峰时间缩短为0.83min,由于HILIC型色谱柱相对平衡较慢,因此设置2min后平衡时间,总体分析时间缩短为4min

图2 利巴韦林LC-MS快速分析结果

 

HPLC Conditions

色谱柱:CAPCELL CORE PC S2.7; 2.1mm i.d.×50mm

流动相:A:5mmol/L乙酸铵(0.2%甲酸) B:乙腈

         B% 95%(0min) ->95%(0.5min) ->50%(2min) ->95%(2.1min) ->95%(4min)

流  速:0.5mL/min

温  度:30°C

检  测:Qtrap 5500; ESI; Positive; MRM

进样量:2 µL

浓  度:2 ng/mL(水溶后使用初始比例流动相稀释

 

综上所述,使用CAPCELL CORE PC S2.7(两性离子亲水性相互作用)色谱柱能够完成《出口动物源食品中利巴韦林残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法》(SN/T 4519-2016)中利巴韦林的良好保留与检测,柱长可根据实际分析需要进行选择。

 

PC HILIC & CAPCELL CORE PC

PC HILIC是在硅胶基材表面以PC基团进行修饰,实现了适用于HILIC色谱柱的超亲水性填料的制造。与普通硅胶色谱柱相比,PC HILIC的亲水性更强,对极性化合物核酸碱基的保留更强。

 

PC HILIC色谱柱 VS 其他公司HILIC色谱柱:在酸性条件下对极性化合物核酸碱基进行分析,因 PC HILIC 具有超强亲水性,对核酸碱基得到了良好保留,有利于分离。另外,理论塔板数也很高,峰形也很尖锐。

 

色谱柱:PC HILIC S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm

流动相:10 mmol/L HCOONH4 (pH 3.5) / CH3CN = 10 / 90
流 速:1.0 mL/min
温 度:40℃
检 测:UV 254 nm
样 品:①萘 ②胸腺嘧啶 ③腺嘌呤 ④胞核嘧啶

 

CAPCELL CORE PC  VS  PC HILIC:出峰更快,具有核-壳型色谱柱柱效高的特点。

 

【液相条件】

流动相:10 mmol/L甲酸铵 / 乙腈 = 10 / 90

流 速:400 μL/min

温 度:40℃

检测器:UV 254 nm

进样量:1 μL

样 品:1. 胸腺嘧啶(5 ppm) 2. 尿嘧啶(5 ppm) 3. 腺嘌呤(5 ppm)  4. 胞嘧啶(5 ppm) 5. 鸟嘌呤(5 ppm)

 

因此,CAPCELL CORE PC S2.7是分析强亲水性化合物的专用核-壳型HILIC色谱柱。

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