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离子交换液相色谱法中缓冲盐的使用
发布时间:2020-09-14   点击次数:1073次

离子交换液相色谱法中缓冲盐的使用

 

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 离子交换色谱法的基本原理

 

离子交换法是针对离子型样品,根据样品离子与固定相表面离子交换基团的交换能力差异进行分离。

 

相较于经典的离子交换树脂,硅胶基质离子交换固定相,机械强度高,耐高压,不溶胀,传质快,柱效高

 

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离子交换法中色谱柱的选择 

 

 

离子交换色谱法中,色谱柱的选择需要与待测组分相匹配,通常不用离子交换柱同时分析阴离子和阳离子。

 

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 离子交换的影响因素

 

样品在离子交换柱中的保留分离,除与样品离子与固定相的作用强弱有关,还受到流动相的pH、离子强度、有机溶剂种类等因素的影响。

 

pH的影响

 

pH的变化会改变离子交换基团上可解离的 H+ 或者OH- 的数量,因此直接影响固定相的离子交换容量。pH对离子交换能力的影响如下图所示。

 

在反相色谱与离子交换中,有一个容易混淆的地方——pH值与pKa的关系

 

反相色谱中,缓冲盐主要是抑制样品中的离子解离,保持分子状态,增强待测物的保留离子交换中,缓冲盐主要是促进样品中的离子解离,保持离子状态,以提高待测物与固定相的离子交换作用

 

因此,阴离子交换(酸性化合物)通常选择pH>pKa+2.0;阳离子交换(碱性化合物)通常选择pH<pKa-2.0.

 

离子强度的影响

 

1. 由于含有不同离子的缓冲盐交换作用不同,因此相对洗脱强度顺序也存在差异。

 

含有阴离子的盐:(强)柠檬酸根>PO43->HCOO->CH3COO->OH-(弱)

含有阳离子的盐:(强)K+>NH4+>Na+>H+>(弱)

 

2. 流动相中盐的浓度越高,其与样品离子争夺固定相上反电荷位置的能力就越强,从而样品的保留效果变差,可通过调节流动相中的缓冲盐浓度改变保留时间。

 

有机溶剂的影响

 

在离子交换中,加入少量的甲醇、乙腈等有机溶剂,可以增加样品的溶解度,减少峰拖尾,但是也可能会降低样品的保留

 

因此,在离子交换方法优化时,可以根据待测物的性质,从梯度洗脱程序,缓冲盐的种类、浓度、pH,以及有机相的种类和比例,这几个方面来进行调整。

 

离子交换色谱柱推荐

 

 

(一)强阳离子交换柱 

 

CAPCELL PAK SCX UG80

 

产品优势:

1. 氢型强阳离子交换柱

2. 兼具包膜技术和高纯硅胶的优点

3. 良好的稳定性、寿命和性价比

 

检测项目:

二甲双胍、利巴韦林、葡jia胺、三聚氰胺、更昔洛韦、水苏碱、羧甲司坦、普鲁卡因按、苯扎氯铵、氨甲环酸、水溶性维生素、核苷酸、生物胺等。

 

 

(二) 弱阴离子交换柱

 

CAPCELL PAK NH2 UG80

 

产品优势:

1. 采用包膜技术和“桥式”键合方式

2. 可在LC-MS中使用

3. 正相、弱阴离子交换两种分配模式

 

检测项目:

糖类、尿囊素、奈达铂、糖精、奎尼酸、双氰胺/三聚氰胺、有机酸、维生素、VE、泛醇、核苷类、百草枯等。

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