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解析Propac系列离子色谱柱的使用方法
发布时间:2022-06-20   点击次数:101次
   Propac系列离子色谱柱是一款专用于单克隆抗体以及相关变异体分析的强阳离子交换柱,具有高柱效和高分离度的色谱柱。采用薄膜无孔核颗粒,能以高分离度和柱效分离蛋白变体,解析仅有单个带电荷残基差异的异构体。亲水层防止不需要的次级相互作用,一致的离子交换表面则提供基于电荷差异或者等电点的差异进行快速传质的来实现高效分离和中等容量。应用包括单克隆抗体酰化作用,脱酰胺作用,唾液酸化等引起的单抗的不均一性。
  
  Propac系列离子色谱柱在使用前,最好进行柱的性能测试,并将结果保存起来,作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意:柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同;另外,在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件),只有这样,测得的结果才有可比性。
  1、样品的前处理:
  a、最好使用流动相溶解样品。
  b、使用前处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。
  c、使用0.45μm的过滤膜过滤除去微粒杂质。
  
  2、流动相的配制:液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的,因此要求流动相具备以下的特点:
  a、流动相对样品具有一定的溶解能力,保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。
  b、流动相具有一定惰性,与样品不产生化学反应(特殊情况除外)。
  c、流动相的黏度要尽量小,以便在使用较长的分析柱时能得到好的分离效果;同时降低柱压降,延长液体泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。
  d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器,最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
  e、流动相沸点不要太低,否则容易产生气泡,导致实验无法进行。
  f、在流动相配制好后,一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测,还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
  
  3、流动相流速的选择:因柱效是柱中流动相线性流速的函数,使用不同的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱,要追求最佳柱效,最好使用最佳流速。对内径为4.6mm的色谱柱,流速一般选择1ml/min,对于内径为4.0mm柱,流速0.8ml/min为佳。当选用最佳流速时,分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时,可适当增加甲醇或乙腈的含量)。

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